Что такое планшеты для пцр
Пробирки и планшеты для ПЦР — это важные расходные компоненты для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР — это метод молекулярной биологии, позволяющий создать копии определенного фрагмента ДНК из исходного образца, повысив его концентрацию в пробе на несколько порядков. ПЦР проводят в ДНК-амплификаторах. В зависимости от формата реакционного блока амплификатора для проведения ПЦР выбирается формат реакционных пробирок и планшет.
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×8, Masterclear, плоские, бесцветные, полипропилен, 120 шт/уп.
Крышки Masterclear Strips идеально подходят для ПЦР в реальном времени, обеспечивают легкую и быструю герметизацию Eppendorf twin.tec PCR планшетов, ПЦР-стрипов и других стандартных многолуночных планшетов.
- Форма перевернутого купола для сокращения объема пробирок препятствует царапанью оптической поверхности;
- оптимизированы для максимальной передачи света;
- сертифицированы на отсутствие человеческой ДНК, ДНКаз и РНКаз, ингибиторов ПЦР;
- нестерильные;
- устойчивы к автоклавированию при 121 °C, 20 мин.
Как 96-луночный планшет используется в тестирование безопасности пищевых продуктов?
Он широко используется при загрязнении пищевых продуктов с помощью теста ELISA, теста PCR и теста бокового потока. 96-луночный планшет, широко используемый в набор для анализа молока в сыром молоке обнаружение остатков антибиотиков. В отличие от традиционной конструкции с боковым потоком, маркированное коллоидное золото не распределяется на нитроцеллюлозной мембране, оно отделено от полоски, нагрузка на 96-луночный планшет помогает повысить чувствительность, быстро разбавить аналит и сократить время обнаружения.
96-луночный планшет-Элиза
Результат теста на оптическую плотность при 405 нм пустого 96-луночного планшета
планшеты с лунками
Крышки для пробирок в стрипах, 0,2 мл, 1×8, выпуклые, бесцветные, Thermowell GOLD
- Соответствуют 1×8 стрипам Thermowell GOLD;
- сертифицированы на отсутствие ДНКаз и РНКаз;
- автоклавируются при 121 °C.
Как определить адсорбцию белка на микропланшете?
Белковый раствор известной концентрации можно использовать для нанесения покрытия на планшет с пустыми лунками для ELISA. Измерьте концентрацию белка в растворе в лунке после нанесения покрытия. Количество белка в лунке до покрытия минус количество белка после покрытия - это количество белка, адсорбированного на планшете. Таким образом, мы можем узнать адсорбционную способность микропланшета.
Внешний вид 96-луночного планшета
Скважины: 96 лунок
В настоящее время наиболее часто используется лунка, поскольку микропланшет используется со считывателем микропланшетов.
Структура: Съемный и несъемный (ТВЕРДЫЙ)
Элиза-тарелка
Цвета: Прозрачный, белый, черный
микропланшет
Боттон:
- F-Боттон (чаще всего используется);
- U-Botton (для хорошего перемешивания),
- V-Botton (для микротитрования),
- C-Botton (плоский центр с закругленными углами для улучшения извлечения жидкости)
Анимированный планшет с лунками для ферментов
После модификации поверхности эталон на спирте имеет положительно заряженную аминогруппу, и ее гидрофобная связь заменяется связью, убивающей воду. Он подходит в качестве твердофазного носителя для низкомолекулярных белков. Используя подходящий буфер и значение pH, поверхность может связываться с небольшими отрицательно заряженными молекулами посредством ионных связей. Благодаря гидрофильным свойствам поверхности и способности ковалентно связываться с другими сшивающими агентами его можно использовать для иммобилизации белковых молекул, растворимых в детергентах, таких как Triton-100 и Tween20. Его недостаток в том, что из-за пониженной гидрофобности некоторые белковые молекулы не могут связываться; Кроме того, его поверхность должна быть эффективно загерметизирована. Из-за характеристик гидрофильной и ковалентной поверхности используемая герметизирующая жидкость должна быть способна взаимодействовать с нереакционноспособными аминогруппами и любыми функциональными группами в выбранном сшивающем агенте.
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×8, MicroAmp, выпуклые, бесцветные, 1500 шт/уп.
Адаптер объема, 96-лун., до 1 мл, не стерильный, 10 шт./уп., 50 шт./кор
Адаптер объема позволяет пропускать через фильтр-планшет большие объемы (до 1 мл). Аппликатор быстро соединяет и разъединяет адаптер и фильтр-планшет, обеспечивая надежное непротекающее соединение.
Сырье 96-луночного планшета
Существует 4 типа материалов: полистирол, ПВХ, поли-D-лизин и кварц. Полистирол обычно используется для изготовления 96-луночного планшета, но полистирол имеет плохую химическую стабильность и может растворяться в различных органических растворителях (таких как ароматические углеводороды, галогенированные углеводороды и т. Д.) И подвергается коррозии сильными кислотами, щелочами и антиоксидантами. -смазка. Легко изменить цвет после облучения ультрафиолетом, поэтому будьте осторожны при использовании.
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×12, MicroAmp, выпуклые, цветные, 200 шт/уп.
Крышки для 96 луночного планшета, на 0,2 мл, 12×8, VersiCap, плоские, бесцветные, ультрапрозрачные, полипропилен, 25 шт/уп.
twin.tec real-time PCR Plate 96, unskirted, low profile, white, 20 pcs.
Размер 96-луночного планшетаs
96-луночные планшеты 96-луночные планшеты
В соответствии со стандартами ANSI / SLAS с 1 по 4-2004 стандартные размеры 96-луночного планшета составляют 127.76 мм (Д) x 85.48 мм (Ш). Это международно признанные стандарты, включающие 5 стандартов, перечисленных ниже:
Планшет с лунками с высоким связыванием
После обработки поверхности белок-связывающая способность планшета для ELISA значительно увеличивается, достигая 300-400 нг 1 гГ / см2, а молекулярная масса основного связывающего белка составляет> 10 кДа. Использование этого типа планшета с лунками может улучшить чувствительность и относительно снизить концентрацию и дозировку белка покрытия. Недостатком является то, что легче производить неспецифические реакции. После нанесения покрытия на антиген или антитело неионные детергенты не могут эффективно изолировать участки несвязанного белка, и белок следует использовать в качестве герметика.
Сравнение ПЦР и LAMP
Таким образом, используя метод LAMP, можно ответить на вопрос «Присутствует ли интересующий нас ген в пробе?» за 5–20 минут [7], в то время как при использовании ПЦР ответа придётся ждать около двух часов, не считая времени на электрофоретическое разделение продуктов. Но, как известно, спешка хороша при ловле блох, а для научного исследования куда важнее точность и специфичность (то есть амплификация всегда и только той последовательности ДНК, которую мы задали, а не просто похожей).
Однако и тут LAMP опережает ПЦР. LAMP более специфичен, потому что ему необходимо узнать целых шесть участков в искомой молекуле ДНК, а ПЦР — только два (которые находятся непосредственно под праймерами). Но, что даже более важно, на LAMP не оказывает влияния присутствие биологических компонентов, зачастую не позволяющих провести ПЦР [8]. Исследуемый образец (например, слюну) можно заносить в реакционную смесь без очистки и искать гены вируса [6]. Благодаря этому свойству, LAMP используется в клинической практике для выявления патогенов человека и животных [9], определения пола коров до имплантации зародыша и даже нахождения метастазов прямо во время хирургической операции [10]. Метод прост в исполнении, дёшев (в отличие от других методов изотермической амплификации) и не требует ни сложной техники, ни обязательных биологических знаний.
Какой из методов лучше применять, зависит от эксперимента. Если исследователь постоянно меняет праймеры, условия или изучаемый ген, то ПЦР будет удобнее. Несмотря на то, что она занимает больше времени, на деле два часа едва хватает, чтобы приготовить смесь для следующей реакции и занести пробы в биохимический планшет. Если же речь идёт о предотвращении пандемии, и необходимо как можно быстрее определить присутствие известного вирусного агента, то, конечно, LAMP. Его можно применять, например, для мониторинга здоровья пассажиров в аэропортах стран, из которых возможно занесение вируса.
В заключение хочу отметить интересную тенденцию научных исследований, проявившуюся в эволюции методов амплификации нуклеиновых кислот. Как указано выше, во время создания ПЦР был выбор между двумя полимеразами: Taq и Bst. Мюллис выбрал Taq и построил свой метод на ней. А Нотоми спустя двадцать лет вернулся к Bst и придумал ещё более мощный метод LAMP.
Планшеты Multiply ® белого цвета идеально подходят для проведения количественных ПЦР исследований в режиме реального времени. За счет улучшения отражательной способности поверхности лунки планшета белого цвета по сравнению с бесцветным планшетом обеспечивается более высокая интенсивность флуоресценции (до 10 раз), что приводит к увеличению чувствительности анализа при работе с образцами ДНК малых объемов или с низкими концентрациями. Нестерильные, сертификат «PCR Perfomance Tested».
- 96-ти луночные планшеты Multiply ® без «юбки» со стандартным и низким профилями.
- Подходят для количественных ПЦР исследований в режиме реального времени (qPCR).
- Буквенно-цифровая маркировка черного цвета для легкой идентификации лунок.
- Возможность разделения планшета на отдельные стрипы.
- Выступающий ободок лунок обеспечивает более эффективную герметизацию и уменьшение риска перекрестной контаминации за счет более плотного прилегания адгезивных пленок.
- Нестерильные, стандарт качества - «PCR Perfomance Tested».
- 96-ти луночные планшеты со стандартным или низким профилями.
- Совместимы с большинством моделей ДНК-амплификаторов/секвенаторов производства Thermo Fisher Scientific (Applied Biosystems), а также ряда других производителей.
- Подходят для автоматизированных систем.
- Возможно изготовление планшетов со штрих-кодом (по запросу).
- Нестерильные, сертификат «PCR Perfomance Tested».
- 96-ти и 384-х луночные планшеты с низким профилем.
- Совместимы с наиболее распространенными моделями ДНК-амплификаторов и секвенаторов ведущих производителей.
- Подходят для автоматизированных систем.
- Возможно изготовление планшетов со штрих-кодом (по запросу).
- Нестерильные, сертификат «PCR Perfomance Tested».
Планшеты Multiply ® с присоединенными стрипами представляют собой 12 стрипов по 8 микропробирок объемом 0,2 мл со стандартным профилем (кат. № 72.985.002), установленными в поликарбонатную рамку (кат № 95.987.002).
- Подходят для количественных ПЦР исследований с детекцией в режиме реального времени (qPCR).
- Совместимы с наиболее распространенными моделями ДНК-амплификаторов ведущих производителей с термоблоком, имеющим объем лунки 0,2 мл. *
- Изготовлены из прозрачного полипропилена.
- Тонкостенные лунки планшета обеспечивают быструю и гомогенную передачу тепла между термоблоком и образцом.
- Прозрачная буквенно-цифровая маркировка для легкой идентификации лунок.
- Совместимы с крышками в стрипах (кат. № 65.989 или 65.989.002).
- Возможность работы со штативом «рабочее место» RackSystem для раскапывания, хранения и переноса планшета в блок ДНК-амплификатора.
- Индивидуально упакованы.
- Стерильные, стандарт качества - «Biosphere ® plus» (сертифицированы на отсутствие ДНК, ДНКаз, РНКаз, АТФ, ингибиторов ПЦР, пирогенов/эндотоксинов).
Предназначены для закрывания 96-ти луночных планшетов Multiply ® во время проведения ПЦР исследований, а также при транспортировке и хранении образцов. Подходят для количественных ПЦР исследований в режиме реального времени.
Нестерильные, стандарт качества - «PCR Perfomance Tested» или стерильные, стандарт качества - «Biosphere ® plus».
Пленки предназначены для заклеивания планшетов при проведении ПЦР исследований, а также при хранении и транспортировке образцов. Высокие адгезивные свойства обеспечивают равномерное прилегание пленки как по краям планшетов, так и по краям лунок, предотвращая испарение и перекрестную контаминацию образцов. Материал пленок устойчив к воздействию органических растворителей.
Двухкомпонентная разборная cистема штативов RackSystem предназначена для раскапывания и хранения образцов при работе как с отдельными, так и стрипованными микропробирками объемом 0,2 мл, а также ПЦР планшетами.
Удобный 96-ти луночный формат совместим со всеми типами современного оборудования. Возможность установки штативов друг на друга обеспечивает экономию пространства при хранении образцов.
** Планшеты белого цвета идеальны для работы с образцами ДНК малых объемов или с низкими концентрациями во время проведения количественных ПЦР исследований в режиме реального времени за счет улучшения отражательной способности поверхности лунки и более высокой интенсивности флуоресценции (до 10 раз) по сравнению с бесцветными планшетами.
- Плоская поверхность рамки планшета обеспечивает максимально надежное и безопасное заклеивание планшета с помощью адгезивных пленок.
- Совместимы с пленками для заклеивания планшетов (кат. № 95.1994 и 95.1999) или крышками в стрипах (кат. № 65.1998.400)
Кат.№
Объем лунки, мл
Описание
Цвет
Сертификат
Упаковка, шт.
96 лунок, с плоской рамкой
PCR Perfomance Tested
* Планшеты белого цвета идеальны для работы с образцами ДНК малых объемов или с низкими концентрациями во время проведения количественных ПЦР исследований в режиме реального времени за счет улучшения отражательной способности поверхности лунки и более высокой интенсивности флуоресценции (до 10 раз) по сравнению с бесцветными планшетами.
- Приподнятые края рамки планшета.
- Совместимы со всеми пленками для заклеивания планшетов производства Sarstedt или крышками в стрипах (кат. № 65.1998.400)
Кат.№
Объем лунки, мл
Описание
Цвет
Сертификат
Упаковка, шт.
96 лунок, приподнятые края рамки
PCR Perfomance Tested
96 лунок, приподнятые края рамки, со штрих-кодом
- Оптимизированы для ДНК-амплификаторов с детекцией в режиме реального времени ABI Fast PCR system (ABI Prism 9800 и 7500 Fast) производства Thermo Fisher Scientific (Applied Biosystems).*
- Низкопрофильные для минимизации мертвого объема и уменьшения времени цикла ПЦР.
- Приподнятые края рамки планшета.
- Совместимы со всеми пленками для заклеивания планшетов производства Sarstedt или крышками в стрипах (кат. № 65.1998.400).
Кат.№
Объем лунки, мл
Описание
Цвет
Сертификат
Упаковка, шт.
96 лунок, приподнятые края рамки, низкопрофильные
PCR Perfomance Tested
** Планшеты белого цвета идеальны для работы с образцами ДНК малых объемов или с низкими концентрациями во время проведения количественных ПЦР исследований в режиме реального времени за счет улучшения отражательной способности поверхности лунки и более высокой интенсивности флуоресценции (до 10 раз) по сравнению с бесцветными планшетами.
- Совместимы с ДНК-амплификаторами Lightcycler ® 96 и 480.
- Низкопрофильные для минимизации мертвого объема и уменьшения времени цикла ПЦР.
- Планшеты белого цвета идеальны для работы с образцами ДНК малых объемов или с низкими концентрациями во время проведения количественных ПЦР исследований в режиме реального времени за счет улучшения отражательной способности поверхности лунки и более высокой интенсивности флуоресценции (до 10 раз) по сравнению с бесцветными планшетами.
- Плоская поверхность рамки планшета обеспечивает максимально надежное и безопасное заклеивание планшета с помощью адгезивных пленок.
- Совместимы с пленками для заклеивания планшетов высокой степени прозрачности (кат. № 95.1994 и 95.1999) или крышками в стрипах (кат. № 65.1998.400).
Кат.№
Объем лунки, мл
Описание
Цвет
Сертификат
Упаковка, шт.
96 лунок, с плоской рамкой, низкопрофильные
PCR Perfomance Tested
Крышки для пробирок в стрипах, 0,2 мл, 1×8, выпуклые, концевая вкладка для легкого удаления крышек, бесцветные
- Соответствуют 1×8 стрипам и планшетам для ПЦР;
- концевая вкладка для легкого удаления крышек.
Microplate 384/V-PP, with bar- code(s), Protein LoBind, def. color (Wells colorless), 80 plates
Крышки для пробирок в стрипах, 0,2 мл, 1×8, плоские, бесцветные, Thermowell GOLD
- Соответствуют 1×8 стрипам Thermowell GOLD;
- оптически прозрачны, пригодны для проведения ПЦР в реальном времени;
- тонкие, равномерные по толщине стенки;
- сертифицированы на отсутствие ДНКаз и РНКаз;
- автоклавируются при 121 °C.
Несъемный 96-луночный планшет
Для несъемных планок колодцев на всей доске соединяют вместе.
twin.tec real-time PCR Plate 96, unskirted, low profile, blue, 20 pcs.
Амплификация ДНК (ПЦР)
Амплификация — это искусственная многократная реплицкация. Итак, процесс репликации ДНК в клетке даже на настоящий момент изучен не до конца. Что же придумал Мюллис 30 лет назад? Как он смог скоординировать, по меньшей мере, десяток ферментов в один момент, о существовании части которых он даже и не знал? Представьте себе, никак. Он взял всего один фермент — ДНК-полимеразу. Доступ к азотистым основаниям обеспечил не белками, а плавлением. («Плавление» ДНК — неферментативное расхождение цепей при нагревании до 92–95 °C.)
Мы помним, что нужен праймер, чтобы «привередливая» полимераза начала работать. Добавляем 18—30-нуклеотидный фрагмент ДНК, комплементарный границе интересующей нас последовательности. Однако больших успехов все равно не получаем. Реакция идёт, но мы не можем сказать, что удваивается именно наш ген, потому что будут получаться фрагменты разной длины, зависящие от времени работы полимеразы и её активности. Как же понять, какой из образующихся продуктов — искомый?
В ответе на этот вопрос и появилась гениальная идея Мюллиса — надо брать не один праймер, а два: прямой (F) и обратный (R). Тогда мы будем знать длину нашего фрагмента и быстро увеличим его количество. Также Мюллис предложил проводить реакцию не один раз, а циклом 30–45 повторов. Математический подсчёт показывает, что количество продукта будет расти как 2 n (рис. 2), где n — число циклов. (А если бы использовался один праймер, то число фрагментов увеличивалось бы просто как n.) То есть через 30 циклов мы получаем в 10 9 (в миллиард) раз больше продукта, чем содержалось в исходном образце (а не в 30 раз больше, как было бы при использовании одного праймера). Почему же такая огромная разница? Дело в том, что при использовании двух праймеров каждый образующийся фрагмент служит матрицей в ходе следующих циклов. В случае одного праймера продукт будет ему не комплементарен и не будет использоваться как матрица в дальнейшем.
Рисунок 2. Схематическое изображение процесса полимеразной цепной реакции. Фиолетовым цветом показана исходная молекула ДНК, жёлтым — образующиеся в ходе реакции молекулы ДНК, идентичные исходной. Видно, что уже после третьего цикла число молекул увеличивается в 8 раз.
Рисунок 3. Цикл амплификации. Каждый цикл состоит из трёх ступеней: расхождение цепей ДНК, посадка праймеров и синтез новых цепей. Каждая ступень длится около 1 минуты. Таким образом, программа из 30 циклов будет длиться около 90 минут.
Сейчас проведение ПЦР занимает около 2 часов, благодаря использованию особой ДНК-полимеразы [2]. Дело в том, что каждый цикл ПЦР начинается с плавления ДНК на 95 °C (рис. 3), а «простая» полимераза — обычный белок — не выдерживала такой температуры и теряла функциональность, свернувшись, как белок варёного яйца. Поэтому по Мюллису после каждого цикла надо было добавлять новую порцию полимеразы. Рэнди Сайки (Randy Saiki) в 1986 году предложил использовать полимеразу из организма, живущего в термальных источниках — бактерии Thermophilus aquaticus (Taq-полимеразу), выдерживающую такой перегрев и работающую оптимально при 72 °C [3].
Как же теперь доказать, что, переливая прозрачные растворы, мы всё-таки не потеряли ДНК? Это можно увидеть глазами после 40-минутнтого разделения продуктов ПЦР в геле с помощью электрофореза. Гель — это, своего рода, молекулярное сито, сквозь которое под действием электрического тока идут молекулы: мелкие проходят быстро, крупные — медленно. Кроме того, фрагменты одинаковой длины концентрируются на одном уровне (а мы, следуя рекомендации Мюллиса, специально подбирали праймеры так, чтобы фрагменты были заданной длины). Всё это рассматривается в ультрафиолетовом (УФ) свете после добавления красителей, связывающихся с ДНК. В итоге мы увидим наш один ген или его фрагмент (или ничего не увидим, если искомой ДНК не было) (рис. 4).
Рисунок 4. Результат разделения продуктов ПЦР в агарозном геле. В качестве красителя, связывающего ДНК, использован бромистый этидий. Съёмка сделана в УФ-свете.
Итак, Мюллис предложил увеличить число иголок в разы, чтобы их блеск без труда можно было различить в сене не интересующей нас ДНК. В настоящее время существует множество модификаций ПЦР, применяемых для самых различных целей. Однако у этой реакции есть существенный минус — потребность в специализированном лабораторном оборудовании: термоциклере-амплификаторе (приборе, способном быстро менять температуру раствора столько раз, сколько нам нужно), камере для электрофореза и т.д. А если этого нет? Можно ли всё провести при одинаковой температуре — например, на водяной бане или в простом термостате? Оказалось, что это возможно, и есть целый ряд методов изотермической амплификации. Слово изотермическая означает, что реакция идёт при постоянной температуре. Наиболее быстрым, специфичным, дешёвым и часто используемым методом является опосредованная образованием петель изотермическая амплификация (loop-mediated isothermal amplification, LAMP). Итак, прольём свет этих LAMP.
Рисунок 5. Схематическое изображение метода LAMP. Для понимания метода вспомните, что синтез идёт от 3′- к 5′-концу (маленькие горизонтальные стрелочки), а обратно — никогда.
Метод LAMP, как и ПЦР, использует термостабильную полимеразу. Примечательно, что, когда искали полимеразу для реакции Мюллиса, нашли две — Taq, которая используется и по сей день для ПЦР, и Bst (из Bacillus stearothermophilus). Было показано, что Bst-полимераза нестабильна и быстро выходит из строя при 95 °C, да и документация к Taq была лучше. Однако у Bst есть преимущество перед Taq: она вымещает вторую цепь ДНК сама, без участия ферментов или использования высоких температур. Использование Bst в методе LAMP позволило проводить реакцию на 30–40 минут быстрее, поскольку исчезает потребность в первом шаге цикла, но это ещё далеко не всё.
В названии метода, кроме постоянства температуры, упоминаются ещё некие петли. Давайте разберёмся. Метод LAMP, описанный японским учёным Цугунори Нотоми (Tsugunori Notomi) в 2000 году [4], подразумевал использование четырех праймеров (пары внутренних и пары внешних), узнающих шесть различных участков искомой ДНК. Внутренние праймеры подобраны таким образом, чтобы сформировать те самые петли на концах искомого фрагмента (рис. 5). Чтобы это удалось, к 5′-концу праймера F2 прикреплена вторая часть, комплементарная F1 части матрицы, — F1c, то есть фрагмент F1c—F2 — это и есть внешний праймер, длинной до 50 нуклеотидов (F от forward, «прямой»). В результате, как только новая цепь ДНК останется одна, из-за вымещающей активности Bst-полимеразы её конец тут же замкнётся в петлю. То же происходит и с праймерами, садящимися на противоположный конец матрицы (B от backward, «обратный»). В конечном итоге, появится одноцепочечный фрагмент ДНК с петлями с обеих сторон — гантелевидная структура (dumbbell structure). На этом завершается первый шаг LAMP.
После получения «гантельки» с одного из её концов (3′) полимераза продолжает синтез к другому (5′), образуя «рукоятку» (stemloop). Концы «рукоятки», оказавшись в одноцепочечном состоянии, замыкаются в петли, продолжая синтез. Так постепенно формируются загзагообразные продукты.
Внешние праймеры (F3 и B3) необходимы лишь в самом начале реакции для разделения двух материнских цепей.
Такой метод позволяет быстрее нарабатывать продукт и длится от часа до получаса. Однако уже через два года этим же учёным удалось усовершенствовать свой метод, добавив ещё одну пару праймеров — петлевые праймеры [5]. При их использовании, предположительно, идёт наработка продукта с петель в обе стороны, а не в одну, как в оригинальном методе. Как показывает график из этой работы (рис. 6), уже через 10–20 минут можно было регистрировать продукт в достаточном количестве.
Рисунок 6. Сравнение эффективности LAMP с добавлением петлевых праймеров (пустые кружки) с классической LAMP (зачернённые кружки). По оси Х отложено время, по оси Y — изменение интенсивности флуоресценции (по нему можно судить об изменение количества ДНК в образце).
Да, как же регистрировать продукт в этой реакции? Представляете, просто взглянув на пробирку (не нужно ждать 40 минут), можно увидеть помутнение — это выпадает осадок пирофосфата магния. Ионы магния входят в состав реакционной среды, помогая работать Bst-полимеразе, а пирофосфат-ионы высвобождаются из нуклеотидов при синтезе цепи. Для верности можно также добавить краситель, связывающий ДНК и осветить УФ (рис. 7).
Рисунок 7. Визуализация результатов LAMP. Это одинаковые пробирки в естественном (слева) и УФ-свете (справа). В подписях указано исходное число молекул ДНК в пробе. Интересно, что даже 5 молекул ДНК в 25 мкл детектируются этим методом.
Спецификация 96-луночных планшетов
96-луночные планшеты
96-луночный шаблон планшета
96-луночный планшет-шаблон
Знаменитый бренд 96-луночного планшета
Компоненты 96-луночного планшета
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×12, MicroAmp, выпуклые, бесцветные, 200 шт/уп.
Крышки для 96 луночного планшета, на 0,2 мл, 12×8, VersiCap, плоские, бесцветные, полипропилен, 25 шт/уп.
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×8, плоские, оптически прозрачные, полипропилен, 120 шт/уп.
- Соответствуют 1×8 стрипам и планшетам для ПЦР;
- оптически прозрачны, пригодны для проведения ПЦР в реальном времени;
- тонкие, равномерные по толщине стенки;
- сертифицированы на отсутствие ДНКаз и РНКаз.
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×8, MicroAmp, выпуклые, цветные, 300 шт/уп.
Крышки для 96 луночного планшета, на 0,2 мл, 12×8, MicroAmp, резина, 5 шт/уп.
twin.tec real-time PCR Plate 96, skirted (Wells white) Blue, 25 pcs.
Well Strip (3 цвета: прозрачный, белый, черный)
лунки-планшеты-лунки-полоски
Для чего используется 96-луночный планшет?
1. Поверхность твердого полистирола в качестве носителя также играет важную роль в адсорбции антигенов, антител или комплексов антиген-антитело.
2. Антигены, антитела и другие биомолекулы адсорбируются на поверхности носителя посредством различных механизмов, включая пассивную адсорбцию через гидрофобные связи, водно-ионные связи, ковалентное связывание посредством введения других активных групп, таких как амино- и углеродные группы, и через гидрофильные склеивание после модификации поверхности.
Используется на различных экспериментальных платформах: реагенты для диагностики in vitro, анализ бокового потока, ELISA, ПЦР, обнаружение нуклеиновых кислот, экстракция ДНК, культура клеток, научные исследования и т. Д.
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×8, Thermowell GOLD, выпуклые, цветные, полипропилен, 125 шт/уп, 1250 шт/кор.
- Соответствуют 1×8 стрипам Thermowell GOLD;
- сертифицированы на отсутствие ДНКаз и РНКаз;
- автоклавируются при 121 °C.
Заключение
планшеты
Обзор
Многие молекулярно-биологические операции напоминают поиск иголки в стоге сена
Автор
Редакторы
Статья на конкурс «био/мол/текст»: Современные биологи в большинстве своём работают с генами. Ген — участок молекулы ДНК, кодирующий белок или РНК. Изучая активность гена и изменения в его работе, чаще всего пользуются методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и различными её модификациями. Метод позволяет найти ген и сделать множество его копий. Однако прибор и реактивы для проведения ПЦР дóроги, а время, необходимое на реакцию, составляет около двух часов. В данной статье описывается аналог полимеразной реакции — LAMP (loop-mediated isothermal amplification), позволяющий провести то же исследование в 10 раз быстрее, дешевле и, что крайне важно, более специфично. Также рассмотрены перспективы применения LAMP в фундаментальных и клинических исследованиях.
Microplate 384/V-PP, with bar- code(s), DNA LoBind, def.color (Wells colorless), 80 plates
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×8, MicroAmp, выпуклые, бесцветные, 300 шт/уп.
Сколько может вместить 96-луночный планшет?
- Диаметр лунки: 6.8 мм;
- Объем 96 лунок: 360 мкл;
- Рабочий объем: 75-250 мкл;
- Максимум. объем: 24,000 мкл на лунку планшета
- 96-луночный планшет: 127.6 * 85.75 = 10941.7 мм²
Камера Frame-Seal, 17 x 28 мм, вместимость 125 мкл, 100 шт
Камеры инкубационные Frame-Seal для методов FISH, ПЦР in situ, PRINS и метода полимеразных колоний
Крышки для пробирок в стрипах, 0,2 мл, 1×8, выпуклые, бесцветные
Крышки Eppendorf cap strips обеспечивают легкую и быструю герметизацию Eppendorf twin.tec PCR планшетов, ПЦР-стрипов и других стандартных многолуночных планшетов.
- Стрипы по восемь крышек для лунок объемом 0.1 и 0.2 мл;
- сертифицированы на отсутствие человеческой ДНК, ДНКаз и РНКаз, ингибиторов ПЦР;
- нестерильные;
- устойчивы к автоклавированию при 121 °C, 20 мин.
Крышки для пробирок в стрипах, 0,2 мл, 1×8, плоские, бесцветные
Крышки Eppendorf strips обеспечивают легкую и быструю герметизацию Eppendorf twin.tec PCR планшетов, ПЦР-стрипов и других стандартных многолуночных планшетов. Плоские крышки в стрипах подходят для ПЦР в реальном времени.
- Сертифицированы на отсутствие человеческой ДНК, ДНКаз и РНКаз, ингибиторов ПЦР;
- нестерильные;
- устойчивы к автоклавированию при 121 °C, 20 мин.
Планшет с лунками для среднего связывания
Планшет для ELISA пассивно сочетается с белым за счет гидрофобной связи на поверхности и подходит в качестве твердофазного носителя для макромолекулярных белков с молекулярной массой 20D. Его связывающая способность с белками составляет 200–300 нг / гГ / см1. Благодаря характеристике планшета для ELISA, который связывается только с макромолекулами, он подходит в качестве твердофазного носителя для неочищенных антител или антигенов и может снизить потенциальные неспецифические перекрестные реакции. Этот микропланшет можно использовать как блокирующий раствор с инертным белком или неионным детергентом.
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×12, выпуклые, бесцветные, полипропилен, 200 шт/уп.
- Соответствуют 1×12 стрипам и планшетам для ПЦР;
- тонкие, равномерные по толщине стенки;
- сертифицированы на отсутствие ДНКаз и РНКаз.
Камера Frame-Seal, 9 x 9 мм, вместимость 25 мкл, 100 шт
Камеры инкубационные Frame-Seal для методов FISH, ПЦР in situ, PRINS и метода полимеразных колоний
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×8, выпуклые, бесцветные, полипропилен, 130 шт/уп.
- Соответствуют 1×8 стрипам и планшетам для ПЦР;
- тонкие, равномерные по толщине стенки;
- сертифицированы на отсутствие ДНКаз и РНКаз.
Репликация ДНК
Природный механизм удвоения ДНК, который происходит перед делением каждой клетки, называется репликация (aka редупликация). Надо сказать, что до сих пор не все белки-участники данного процесса изучены, что говорит о его сложности. Главное, что происходит при репликации — сборка дочерней цепи ДНК на половине материнской. Напомню, что ДНК представляет собой двойную спираль, а информативная часть — азотистые основания — скрыта внутри спирали. Задача удвоения ДНК состоит в том, чтобы правильно собрать нуклеотиды в новую цепь и получить две идентичные молекулы. Собирает нуклеотиды фермент ДНК-полимераза. Но как ей добраться до азотистых оснований, скрытых в материнской цепи? Ответ прост — расплести цепи. Исполнение же трудно и требует участия целого ряда ферментов — гираз, лигаз, топоизомераз, белков, связывающих одиночную нить ДНК и препятствующих её повторному воссоединению (SSB белков). Тем не менее, ансамбль белков справляется с этой задачей (рис. 1). Итак, есть ДНК-полимераза, ей доступны азотистые основания матрицы, но что-то синтез не идёт.
Рисунок 1. Репликация ДНК. Обратите внимание, как много белков участвует в этом процессе.
Дело в том, что полимераза — фермент привередливый, синтез ДНК «с нуля» и не пойдёт: необходима затравка (праймер) — свободная OH-группа предыдущего нуклеотида или какого-либо белка. Теперь, присоединяя нуклеотиды к праймеру, ДНК-полимераза может копировать материнскую цепь.
Типы 96-луночных планшетов
Согласно считывателю микропланшетов, он делится на съемный и несъемный.
Крышка
лунки-крышки
Конкурс «био/мол/текст»-2014
Эта работа представлена в номинации «Лучший обзор» и заслужила приз зрительских симпатий конкурса «био/мол/текст»-2014.
Главный спонсор конкурса — дальновидная компания «Генотек».
Конкурс поддержан ОАО «РВК».
Спонсором номинации «Биоинформатика» является Институт биоинформатики.
Спонсором приза зрительских симпатий выступила фирма Helicon.
Свой приз также вручает Фонд поддержки передовых биотехнологий.
Как это здорово звучит: я занимаюсь генетикой, работаю с ДНК, РНК, получаю ГМО. Как это странно выглядит: я добавляю прозрачные растворы к прозрачным растворам, ставлю в сложный прибор, который показывает, сколько у меня ДНК, или из каких нуклеотидов она состоит. Конечно, целая молекула ДНК, особенно в связи с белками, поддерживающими её структуру (aka хромосома), ещё видна в микроскоп, но представьте себе один ген, один небольшой участок хромосомы. Чтобы работать с одним геном, его нужно сначала найти. Представьте, найти определённый участок, состоящий из 10000 букв (нуклеотидов) среди 3 миллиардов таких же букв! Разница в пять порядков. Это действительно сравнимо с поиском иголки в стоге сена.
Первым механизм такого поиска в 1983 году запатентовал Кэри Мюллис (Kary Mullis) [1]. Он предложил наработать множество копий исследуемой ДНК. Чтобы понять метод Мюллиса, широко известный как полимеразная цепная реакция (ПЦР) [11] и используемый уже более 30 лет практически в каждой лаборатории мира, обратимся к истокам. Как происходит увеличение количества ДНК в живом организме в естественных условиях.
Съемный 96-луночный планшет
Тогда съемное состоит в том, что полоски лунок на доске разделены, а отдельные полоски составляют 8 лунок или 12 лунок на полоску.
Обычно используются съемные микропланшеты. Хотя все планшеты с лунками имеют одинаковый внешний вид, но разные бренды имеют свои технические различия, такие как структура, характеристики адсорбции белка и т. Д. Выбирая 96-луночный планшет, вы также должны учитывать, какой бренд считывателя микропланшетов вам лучше.
По разной способности связывания с белком и другими молекулами планшет для ИФА можно разделить на следующие категории:
Доска (3 цвета: прозрачный, белый, черный)
микропланшеты-96-луночные планшеты
Камера Frame-Seal, 15 x 15 мм, вместимость 65 мкл, 100 шт
Камеры инкубационные Frame-Seal для методов FISH, ПЦР in situ, PRINS и метода полимеразных колоний
Камера Frame-Seal, 19 x 60 мм, вместимость 300 мкл, 100 шт
Камеры инкубационные Frame-Seal для методов FISH, ПЦР in situ, PRINS и метода полимеразных колоний
Крышки для пробирок в стрипах, на 0,2 мл, 1×8, выпуклые, бесцветные, 125 шт./уп., 1250 шт./кор.
Соответствуют 1×8 стрипам на 0,2 мл.
- Сертифицированы на отсутствие ДНКаз и РНКаз;
- апирогенные;
- нестерильные;
- 99,9% чистый полипропилен.
Метод ПЦР обладает высокой специфичностью и чувствительностью, поэтому материал, из которого изготавливаются пробирки и планшеты для ПЦР, в частности полипропилен, должен быть очищен от посторонних примесей, в том числе от РНКаз, ДНКаз, эндотоксинов, пирогенов, которые непосредственно могут повлиять на ход реакции. Так как проведение ПЦР предполагает цикличное нагревание пробы, то для оптимального теплопереноса, одинакового для каждого образца, стенки пробирок и стенки лунок планшет должны быть ультратонкими и равномерными по толщине.
- без юбки, универсальные планшеты, подходящие для широкого спектра амплификаторов;
- с полуюбкой из поликарбонатной рамки, за счет чего планшету придается дополнительная прочность и появляется возможность автоматизировать процесс пробоподготовки;
- с юбкой из жесткой поликарбонатной рамки, предотвращающей любую деформацию планшета в ходе всего рабочего процесса, включающего автоматическую пробоподготовку, проведение ПЦР и дальнейший генетический анализ.
Для "классической" ПЦР подойдет любой из вышеуказанных способов запечатывания планшета. Для ПЦР в реальном времени рекомендуется использовать ультра- и оптически прозрачные крышки и пленки.
96-луночный планшет является одним из типов ELISA PLATE, играет ключевую роль в иммуноферментном анализе (ИФА). Он участвует в иммунологической реакции, такой как: покрытие антителом или антигеном, буферный блок и т. Д.
Планшет с лунками производится в чистой комнате GMP. Качество продукции строго контролируется в соответствии с требованиями стандартов ISO и ANSI / SLAS для обеспечения стабильности партий продукции. Коэффициент вариации продукта для каждого отверстия в пластине и партии составляет менее 5%. В продукте используется оптимизированная технология обработки поверхности, которая эффективно улучшает адсорбционную способность белка с высокой и средней связывающей способностью. Планшет для ИФА, и улучшает чувствительность продукта к обнаружению адсорбции белка. Его можно широко использовать в различных типах ELISA, ПЦР-детекции, культивировании клеток, научных исследованиях и т. Д.
96-луночный планшет
twin.tec Adapter for PCR Plate unskirted, for LC 481
Читайте также: